产品货号：
KL240732
中文名称：
植物rRNA去除试剂盒(核糖核酸酶H法)
英文名称：
Plant rRNA Depletion Kit
产品规格：
10T
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本试剂盒利用核糖核酸酶H消化法去除植物来源总RNA中的核糖体RNA（包括细胞质18S、25S rRNA，线粒体18S、26S rRNA，叶绿体16S、23S rRNA）以保留信使RNA (mRNA)和其它非编码RNA。该试剂盒对于完整和部分降解的总RNA均具有良好的rRNA去除效果。经rRNA去除所获得的RNA样本可用于高通量测序分析mRNA和非编码RNA，可显著提高测序结果中有效数据比例，也可用于cDNA合成或其它下游应用。
- 植物样本覆盖度高，rRNA残留率低。
- 核糖核酸酶H酶法核糖体去除，去除效率高。
- 兼容性好：可承接多数总RNA建库试剂盒。
| 组分 | 规格 |
| 杂交缓冲液 | 72μL |
| 植物探针混合液 | 72μL |
| 核糖核酸酶H缓冲液 | 72μL |
| 核糖核酸酶H | 48μL |
| 脱氧核糖核酸酶I缓冲液 | 660μL |
| 脱氧核糖核酸酶I | 60μL |
保存：-20℃，有效期1年。
RNA纯化磁珠，无核酶水，无水乙醇等。
一、探针杂交
- 将探针混合液和杂交缓冲液从-20℃取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。
- 准备RNA样品：根据投入量和样品浓度，计算RNA取样体积，用无核酶水稀释至11μL。
- 按照表1于200μL PCR管中配制rRNA去除反应体系。
成分 用量 杂交缓冲液 3μL 植物探针混合液 3μL 植物总RNA(100ng～1μg) 9μL 总量 15μL - 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
- 将上述PCR管置于PCR仪中，按照表2所示反应程序，进行探针杂交反应。
温度 时间 热盖105℃ On 95℃ 2min 95℃～22℃ 0.1℃/s 22℃ 5min 4℃ Hold
二、核糖核酸酶H消化
- 将核糖核酸酶H消化试剂从-20℃取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表3所示，配制核糖核酸酶H消化反应体系。
成分 用量 核糖核酸酶H缓冲液 3μL 核糖核酸酶H 2μL 上一步产物 15μL 总量 20μL - 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
- 将上述PCR管置于PCR仪中，设置反应程序：热盖50℃，37℃，30min；4℃，hold，进行核糖核酸酶H消化反应。
三、脱氧核糖核酸酶I消化
- 将脱氧核糖核酸酶I消化试剂从-20℃取出，解冻后颠倒混匀，置于冰上备用。按照表4所示，配制脱氧核糖核酸酶I消化反应体系。
成分 用量 脱氧核糖核酸酶I缓冲液 27.5μL 脱氧核糖核酸酶I 2.5μL 上一步产物 20μL 总量 50μL - 使用移液器轻轻吹打混匀，瞬离将反应液离心至管底。
- 将上述PCR管置于PCR仪中，设置反应程序：热盖50℃，37℃，30min；4℃，hold，进行脱氧核糖核酸酶I消化反应。
四、RNA的纯化
- 准备工作：将RNA纯化磁珠由冰箱中取出，室温平衡至少30min。用无核酶水配制80%乙醇。
- 涡旋振荡或充分颠倒磁珠以保证充分混匀。
- 吸取110μL RNA纯化磁珠至上一步产物中，移液器充分吹打混匀，室温孵育5min。
- 将PCR管置于磁力架中分离磁珠和液体，待溶液澄清后（约3min），小心移除上清。
- 保持PCR管始终置于磁力架中，加入200μL无核酶水新鲜配制的80%乙醇漂洗磁珠，室温孵育30sec后，小心移除上清。
- 重复步骤16，总计漂洗两次。用10μL移液器吸干净残留液体。
- 保持PCR管始终置于磁力架中，室温下开盖干燥磁珠(5～10min)。
- RNA洗脱：将PCR管从磁力架上取下，加入11μL无核酶水（或使用适合下游实验的相应体积无核酶水或洗脱缓冲液），使用移液器轻轻吹打至充分混匀，室温静置5min。
- 将PCR管短暂离心并置于磁力架中静置，待溶液澄清后（约3min），小心移取10μL上清（可根据步骤19选择的实际洗脱体积进行相应调整）至新的无核酶PCR管中。
五、注意事项
- 洗脱后的样品请立即进行下游实验，或置于-80℃存放。
- 请使用无RNase污染的耗材，并对实验区域定期进行清理。
- RNA样品应不含基因组DNA污染。
- RNA样品最大投入体积为10μL，若样品体积较大，可先进行浓缩。
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